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在PCR(聚合酶鏈式反應)生物實驗中,常用的染料根據用途主要分為以下幾類:
一、核酸電泳染色染料(用于檢測PCR產物)
1、溴化乙錠(Ethidium Bromide, EtBr)
傳統的核酸染料,與DNA結合后在紫外光下發出橙紅色熒光。
注意:有潛在致癌性,需謹慎操作。
2、SYBR系列染料(如SYBR Green I/SYBR Gold)
靈敏度高于EtBr,更安全(但仍需防護),需避光保存。
SYBR Green I也常用于實時熒光定量PCR(qPCR)。
3、GelRed/GelGreen
安全性更高(無誘變性),靈敏度與EtBr相當,需紫外或藍光激發。
其他替代染料:如SYBR Safe、EvaGreen(也可用于qPCR)等。
二、實時熒光定量PCR(qPCR)染料
1、SYBR Green I
非特異性結合雙鏈DNA,通過熒光強度定量產物,需配合熔解曲線分析。
2、EvaGreen
類似SYBR Green,但熒光信號更強,適用于高分辨率熔解曲線分析(HRM)。
3、探針類染料(需特異性設計探針)
TaqMan探針:基于熒光共振能量轉移(FRET),標記報告基團(如FAM)和淬滅基團。
分子信標(Molecular Beacon):發夾結構探針,特異性高。
三、其他輔助染料
1、Loading Dye(上樣緩沖液染料)
如溴酚藍(Bromophenol Blue)或二甲苯青(Xylene Cyanol),用于電泳時指示遷移進度。
2、DNA ladder標記染料
預染的DNA分子量標準(如預混SYBR Green或EtBr)。
根據實驗需求(如常規檢測、定量、安全性等)選擇合適的染料即可。