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做PCR實(shí)驗(yàn)需要哪些儀器和試劑耗材?

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PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))實(shí)驗(yàn)室通常需要以下幾類儀器設(shè)備及耗材:

 

一、儀器設(shè)備

1、PCR 擴(kuò)增儀:這是核心設(shè)備,能夠按照設(shè)定的程序?qū)颖局械奶囟ㄆ芜M(jìn)行快速、大量的擴(kuò)增,以滿足后續(xù)檢測(cè)分析需求。

2、核酸提取儀:用于從各種生物樣本(如血液、組織、拭子等)中提取出核酸(DNA 或 RNA),方便后續(xù)的 PCR 反應(yīng)。

3、生物安全柜:可保護(hù)實(shí)驗(yàn)人員、樣本以及環(huán)境,避免在操作過(guò)程中發(fā)生樣本氣溶膠等有害物質(zhì)的擴(kuò)散,尤其是在處理具有潛在感染性的樣本時(shí)十分關(guān)鍵。

4、離心機(jī):用于對(duì)樣本進(jìn)行離心處理,比如將血液樣本進(jìn)行離心分層,以便獲取血細(xì)胞等用于核酸提取的部分,有不同轉(zhuǎn)速規(guī)格可供選擇,以適應(yīng)不同類型樣本的離心需求。

5、移液器:精確量取不同體積的液體試劑,如提取試劑、反應(yīng)緩沖液、引物等,常見(jiàn)的有單通道和多通道移液器,可根據(jù)實(shí)際操作情況選用。

6、超凈工作臺(tái):提供局部的無(wú)菌操作環(huán)境,利于試劑配制等操作,保證實(shí)驗(yàn)過(guò)程不受外界微生物等污染。

7、冰箱:包括普通冷藏冰箱(用于存放一些酶、緩沖液等需要低溫保存但不需要過(guò)低溫度的試劑)和超低溫冰箱(用于長(zhǎng)期保存核酸樣本、珍貴的引物等對(duì)溫度要求苛刻的物品)。

8、恒溫金屬浴:可對(duì)裝有樣本或試劑的離心管等進(jìn)行恒溫加熱,便于進(jìn)行核酸變性、酶反應(yīng)等需要精確溫度控制的步驟。

9、凝膠成像系統(tǒng):在進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物后,用于觀察和拍攝電泳條帶,分析擴(kuò)增結(jié)果的準(zhǔn)確性、片段大小等情況。

10、電泳儀:配合瓊脂糖凝膠電泳,為核酸在凝膠中的遷移提供穩(wěn)定的電場(chǎng),使不同大小的核酸片段能依據(jù)其分子量大小在凝膠中分離,進(jìn)而輔助判斷 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物情況。

 

二、耗材

1、PCR 反應(yīng)管:是進(jìn)行 PCR 反應(yīng)的容器,一般為薄壁管,利于熱量傳遞,確保反應(yīng)過(guò)程中各管內(nèi)溫度均勻一致,且有不同規(guī)格,常見(jiàn)的為 0.2ml、0.5ml 等。

2、槍頭:與移液器配套使用,有不同量程規(guī)格對(duì)應(yīng)的槍頭,如 10μl、200μl、1000μl 等,需要保證槍頭的無(wú)菌和無(wú)核酸酶污染,確保量取液體的準(zhǔn)確性和樣本不受污染。

3、離心管:用于樣本的離心、試劑的分裝等,材質(zhì)多樣,常用的有塑料材質(zhì)的,有不同規(guī)格,例如 1.5ml、5ml 等,有的還帶有螺旋蓋等便于密封保存。

4、一次性手套:實(shí)驗(yàn)人員操作時(shí)佩戴,防止手上的汗液、皮屑等污染樣本和試劑,同時(shí)也保護(hù)自身免受潛在有害樣本的侵害,通常選用無(wú)粉、耐化學(xué)腐蝕的手套。

5、口罩:減少實(shí)驗(yàn)人員呼出的氣體等對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境和樣本的影響,維持相對(duì)潔凈的操作空間。

6、防護(hù)服:在處理一些有感染風(fēng)險(xiǎn)的樣本或者對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求較高的情況下穿著,避免衣物上的灰塵等雜質(zhì)帶入實(shí)驗(yàn)室以及防止樣本接觸到人體。

7、核酸提取試劑盒:包含了從樣本中提取核酸所需的各種試劑,不同樣本類型(如病毒、細(xì)菌、細(xì)胞等)可能需要使用相應(yīng)適配的試劑盒。

8、PCR 反應(yīng)試劑盒:內(nèi)有進(jìn)行 PCR 反應(yīng)所需要的試劑,像 DNA 聚合酶、dNTP、反應(yīng)緩沖液以及引物等成分,有的是通用型,有的則是針對(duì)特定檢測(cè)目標(biāo)設(shè)計(jì)的專用試劑盒。

9、瓊脂糖:用于配制瓊脂糖凝膠,作為電泳時(shí)核酸分離的介質(zhì),通過(guò)不同濃度的瓊脂糖凝膠可以實(shí)現(xiàn)對(duì)不同大小范圍核酸片段的有效分離。

10、電泳緩沖液:如常用的 TAE、TBE 緩沖液,為核酸在凝膠中的電泳遷移提供穩(wěn)定的離子環(huán)境,保證電泳過(guò)程能正常進(jìn)行。

 

不同用途和規(guī)模的 PCR 實(shí)驗(yàn)室在具體的儀器設(shè)備和耗材選擇上可能會(huì)有所側(cè)重和差異,但總體上都圍繞保障核酸提取、PCR 擴(kuò)增以及結(jié)果檢測(cè)分析等環(huán)節(jié)的順利開(kāi)展來(lái)配備。

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